BRCA1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400093-LAC

BRCA1 codifica il soppressore tumorale umano BRCA1, una proteina nucleare multifunzionale essenziale per mantenere l’integrità del genoma. BRCA1 coordina la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA tramite ricombinazione omologa, contribuisce alla segnalazione dei checkpoint e si integra con le risposte allo stress replicativo e con il rimodellamento della cromatina attraverso complessi proteici come BRCA1–BARD1. Grazie all’attività di ligasi dell’ubiquitina e alla regolazione della trascrizione e della dinamica dei foci di danno al DNA, BRCA1 aiuta a controllare la progressione del ciclo cellulare e a preservare la stabilità cromosomica. L’alterazione o la disregolazione di BRCA1 è fortemente associata a una ridotta capacità di riparazione del DNA e a un’aumentata instabilità genomica, rendendolo un nodo chiave nelle vie di risposta al danno del DNA rilevanti per la ricerca in biologia del cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale BRCA1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BRCA1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BRCA1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BRCA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BRCA1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BRCA1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.