BPI Plasmide Double Nickase (h): sc-404909-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BPI Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BPI Double Nickase Plasmid (h) e il BPI Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BPI. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BPI Antibody (H-10): sc-514212
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BPI Plasmide Double Nickase (h) | sc-404909-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BPI Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404909-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La BPI umana (bactericidal/permeability-increasing protein) è una proteina dei granuli dei neutrofili che si lega al lipopolisaccaride (LPS) dei batteri Gram-negativi, neutralizzando l’attività endotossica e favorendo l’uccisione batterica. Partecipa alla difesa immunitaria innata a livello mucosale e sistemico modulando la segnalazione infiammatoria a valle del riconoscimento dell’LPS, incluse vie che convergono sulla produzione di citochine e sull’attivazione delle cellule mieloidi. Le variazioni nell’espressione o nella funzione della BPI sono state studiate nel contesto delle malattie infiammatorie delle vie aeree, delle infezioni associate alla fibrosi cistica, dell’endotossiemia correlata alla sepsi e di altre condizioni in cui interazioni ospite–patogeno disregolate contribuiscono alla patologia. La perturbazione sperimentale della BPI supporta studi meccanicistici sulla funzione di barriera antimicrobica, sulla biologia dei neutrofili e sulle risposte infiammatorie guidate dall’LPS.
BPI Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BPI nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BPI. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BPI. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BPI interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.