BPI Double Nickaseプラスミド (h): sc-404909-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- BPI Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- BPIダブルニカースプラスミド（h）およびBPIダブルニカースプラスミド（h2）は、BPIを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: BPI 抗体 (H-10): sc-514212
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
BPI Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404909-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BPI Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404909-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトBPI（bactericidal/permeability-increasing protein：殺菌・透過性増強タンパク質）は、好中球顆粒に存在するタンパク質で、グラム陰性菌のリポ多糖（LPS）に結合し、エンドトキシン活性を中和するとともに細菌の殺傷を促進します。BPIは、LPS認識後の下流で炎症シグナル伝達を調節し、サイトカイン産生や骨髄系細胞の活性化へと収束する経路を含む反応に関与することで、粘膜および全身の部位における自然免疫防御に寄与します。BPIの発現量や機能の変動は、炎症性気道疾患、嚢胞性線維症に伴う感染、敗血症関連エンドトキシン血症など、宿主—病原体相互作用の破綻が病態に関与するさまざまな状況で研究されています。BPIを実験的に操作することは、抗菌バリア機能、好中球生物学、ならびにLPS駆動性の炎症応答に関する機序研究を支持します。
BPI ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BPI 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BPI内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BPIの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BPIが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。