Plásmido CRISPR de Activación (m) BNIP-3: sc-419356-ACT

El gen Bnip3 de ratón codifica BNIP-3, un miembro de la familia BCL2 con dominio BH3 exclusivo e inducible por hipoxia, que se localiza principalmente en la membrana externa mitocondrial y regula la homeostasis mitocondrial. BNIP-3 promueve la despolarización mitocondrial, la mitofagia y la muerte celular programada mediante vías vinculadas a la señalización de HIF-1, la dinámica autofagosoma–lisosoma y la interacción con reguladores de la apoptosis. En tejidos sometidos a estrés metabólico, BNIP-3 ayuda a ajustar el equilibrio entre la supervivencia y la eliminación de mitocondrias dañadas, modulando la producción de especies reactivas de oxígeno y la adaptación bioenergética. La actividad desregulada de BNIP-3 se ha implicado en contextos de lesión isquémica, neurodegeneración e hipoxia en el microambiente tumoral, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la adaptación al estrés y el control de calidad mitocondrial en modelos murinos.

BNIP-3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Bnip3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BNIP-3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Bnip3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Bnip3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BNIP-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Bnip3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BNIP-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BNIP-3 en células tumorales con expresión de Bnip3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.