Plásmido Doble Nickase (h) beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3: sc-404570-NIC

ATP1B3 codifica la subunidad beta 3 de la Na⁺/K⁺-ATPasa, un complejo ATPasa tipo P de la membrana plasmática esencial para mantener los gradientes de Na⁺ y K⁺ que sostienen el potencial de membrana, el equilibrio osmótico y el transporte activo secundario. Más allá de la homeostasis iónica, las subunidades de la Na⁺/K⁺-ATPasa participan en el ensamblaje y el tráfico de la bomba y pueden influir en las salidas de señalización vinculadas a la adhesión celular, la migración y el control del crecimiento. La expresión de ATP1B3 y la función de la bomba se entrecruzan con procesos como la polaridad epitelial, la excitabilidad neuronal y las respuestas al estrés mediante la regulación dependiente de iones de transportadores y quinasas. La desregulación de la composición de subunidades de la Na⁺/K⁺-ATPasa se ha asociado con una señalización proliferativa alterada y disfunción tisular, lo que convierte a ATP1B3 en una diana útil para estudios mecanísticos del transporte de membrana y la interacción (crosstalk) entre vías de señalización.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP1B3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP1B3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP1B3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP1B3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.