beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404570-NIC

ATP1B3 codifica la subunità beta 3 della Na⁺/K⁺-ATPasi, un complesso ATPasico di tipo P della membrana plasmatica essenziale per mantenere i gradienti di Na⁺ e K⁺ che sostengono il potenziale di membrana, l’equilibrio osmotico e il trasporto attivo secondario. Oltre all’omeostasi ionica, le subunità della Na⁺/K⁺-ATPasi partecipano all’assemblaggio e al traffico della pompa e possono influenzare output di segnalazione legati ad adesione cellulare, migrazione e controllo della crescita. L’espressione di ATP1B3 e la funzione della pompa si intrecciano con processi quali la polarità epiteliale, l’eccitabilità neuronale e le risposte allo stress attraverso la regolazione, dipendente dagli ioni, di trasportatori e chinasi. La disregolazione della composizione delle subunità della Na⁺/K⁺-ATPasi è stata associata ad alterazioni della segnalazione proliferativa e a disfunzioni tissutali, rendendo ATP1B3 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul trasporto di membrana e sul crosstalk della segnalazione.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP1B3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP1B3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP1B3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP1B3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.