BDNF Plasmide Double Nickase (m): sc-419319-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BDNF Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BDNF Double Nickase Plasmid (m) e il BDNF Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Bdnf. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: pro BDNF Antibody (5H8): sc-65514
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BDNF Plasmide Double Nickase (m) | sc-419319-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BDNF Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419319-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Bdnf** codifica il fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF), una neurotrofina secreta essenziale per la sopravvivenza neuronale, la differenziazione e la plasticità sinaptica dipendente dall’attività. Dopo il legame con TrkB (NTRK2), il BDNF attiva le vie di segnalazione a valle MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ per regolare l’estensione dei neuriti, il potenziamento a lungo termine e programmi trascrizionali associati alla maturazione dei circuiti. Nel SNC e nei tessuti periferici, il BDNF influenza inoltre la neurogenesi e l’omeostasi metabolica attraverso interazioni neurone–glia e neuroendocrine. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione del BDNF sono state associate a fenotipi di neurosviluppo e neurodegenerazione, a comportamenti correlati allo stress e alla suscettibilità alle crisi epilettiche, rendendo **Bdnf** un bersaglio centrale per studi meccanicistici della funzione cerebrale e di vie rilevanti per la malattia.
BDNF Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Bdnf nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Bdnf. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Bdnf. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Bdnf interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.