Bcr Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401514-ACT

Il gene umano **BCR** codifica la proteina Bcr, un regolatore citoplasmatico multifunzionale con attività chinasica serina/treonina e un dominio RhoGEF che modula la segnalazione delle piccole GTPasi. Attraverso effetti sulla dinamica del citoscheletro dipendente da RAC1/CDC42, sul traffico di membrana e sulla segnalazione responsiva allo stress, Bcr contribuisce al controllo dell’adesione cellulare, della migrazione e della proliferazione. **BCR** è ampiamente studiato nella biologia delle neoplasie ematologiche per il suo coinvolgimento in eventi oncogenici di fusione genica e nel conseguente rimodellamento della segnalazione a valle. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di **BCR** rappresentano un punto di accesso pratico per analizzare vie di segnalazione legate a chinasi e GTPasi rilevanti per la trasformazione e per programmi di segnalazione specifici di linea cellulare.

Bcr Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Bcr Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Bcr. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Bcr nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Bcr nelle cellule tumorali con espressione di BCR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.