Bcl10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400483-ACT

BCL10 codifica Bcl10, una proteina adattatrice che collega la segnalazione del recettore dell’antigene a programmi trascrizionali a valle nelle cellule immunitarie. Bcl10 agisce all’interno del complesso CARMA1–Bcl10–MALT1 (CBM) per promuovere l’attivazione canonica di NF-κB, sostenendo l’attivazione e la proliferazione dei linfociti e le risposte citochiniche, e può inoltre influenzare la segnalazione MAPK e l’apoptosi. Un’attività o una localizzazione disfunzionale di BCL10 è stata associata ad alterazioni dell’output della via di NF-κB e dell’omeostasi immunitaria, ed è frequentemente studiata nel contesto della biologia delle neoplasie linfoidi e delle reti di segnalazione infiammatoria. Di conseguenza, BCL10 rappresenta un nodo comune per studi meccanicistici sulla segnalazione prossimale al recettore, sulla regolazione trascrizionale e sul crosstalk tra vie di segnalazione.

Bcl10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCL10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Bcl10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCL10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCL10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Bcl10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCL10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Bcl10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Bcl10 nelle cellule tumorali con espressione di BCL10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.