Bcl-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400740-ACT

BCL3 codiert für Bcl-3, ein atypisches Mitglied der IκB-Familie, das vor allem im Zellkern als transkriptioneller Koregulator von NF-κB‑p50/p52‑Homodimeren wirkt. Durch die Modulation der κB‑abhängigen Genexpression beeinflusst Bcl-3 inflammatorische Signalwege, die Aktivierung von Lymphozyten, die Zellzyklusprogression und Apoptoseprogramme und integriert dabei Signale aus den kanonischen und nichtkanonischen NF-κB‑Signalwegen. Eine veränderte BCL3‑Expression oder -Regulation wurde mit Immunfehlregulation und onkogenen Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, auch in Kontexten, in denen die NF-κB‑Signalgebung dauerhaft aktiviert ist. Als Knotenpunkt im Signalweg wird Bcl-3 häufig aufgrund seiner Rolle in der chromatinassoziierten transkriptionellen Kontrolle und dem stimulusabhängigen Umbau von Gennetzwerken untersucht.

Bcl-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BCL3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Bcl-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BCL3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BCL3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Bcl-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BCL3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Bcl-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Bcl-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BCL3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.