Bcl-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400740-ACT

BCL3 codifica per Bcl-3, un membro atipico della famiglia IκB che agisce principalmente nel nucleo come co-regolatore trascrizionale degli omodimeri NF-κB p50/p52. Modulando l’espressione genica dipendente dai siti κB, Bcl-3 influenza la segnalazione infiammatoria, l’attivazione dei linfociti, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di apoptosi, integrando segnali provenienti dalle vie canonica e non canonica di NF-κB. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di BCL3 sono state collegate a disfunzioni immunitarie e a stati trascrizionali oncogenici, anche in contesti in cui la segnalazione NF-κB è attivata in modo persistente. Come nodo di via, Bcl-3 è spesso studiato per il suo ruolo nel controllo trascrizionale associato alla cromatina e nel rimodellamento delle reti geniche dipendente dagli stimoli.

Bcl-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCL3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Bcl-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCL3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCL3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Bcl-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCL3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Bcl-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Bcl-3 nelle cellule tumorali con espressione di BCL3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.