BCAP Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-429913-LAC

Il gene murino **Pik3ap1** codifica l’adattatore dei linfociti B per PI3K (BCAP), un’impalcatura di segnalazione citosolica che collega gli input del recettore dell’antigene e dei recettori dell’immunità innata all’attivazione della fosfoinositide 3-chinasi. BCAP contribuisce a integrare i segnali provenienti dal recettore dei linfociti B, dai TLR e dai recettori per le citochine per modulare la segnalazione PI3K–AKT, l’attività MAPK a valle e i programmi trascrizionali che determinano proliferazione, sopravvivenza e differenziamento. Nelle cellule immunitarie, BCAP influenza il flusso di calcio, la riprogrammazione metabolica e le dinamiche del citoscheletro che supportano attivazione e migrazione. Una segnalazione deregolata della via PI3K e un’alterata funzione degli adattatori sono rilevanti negli studi su infiammazione, autoimmunità e biologia delle neoplasie ematologiche, in cui risultano perturbate le soglie di segnalazione e le decisioni di destino di linea.

Le particelle di attivazione lentivirale BCAP (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pik3ap1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BCAP (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pik3ap1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BCAP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pik3ap1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.