BAZ2B Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-436575-ACT

Il gene murino Baz2b codifica BAZ2B, un regolatore della cromatina contenente un bromodominio che riconosce i segni di acetil-lisina sugli istoni e contribuisce a coordinare il rimodellamento dei nucleosomi e il controllo trascrizionale. Attraverso il suo ruolo nell’accessibilità della cromatina e nella regolazione epigenetica, BAZ2B può influenzare programmi genici dello sviluppo, il mantenimento dell’identità cellulare e reti trascrizionali responsabili agli stimoli. Alterazioni della segnalazione mediata dal bromodominio e un rimodellamento della cromatina deregolato sono ampiamente collegati a meccanismi rilevanti per il neurosviluppo, l’omeostasi metabolica e stati trascrizionali oncogeni, rendendo Baz2b un nodo utile per studiare le interazioni tra vie epigenetiche. La modulazione sperimentale dell’espressione di Baz2b supporta studi sulla funzione di promotori/enhancer, sulla trascrizione dipendente dalla cromatina e sul riassetto delle reti geniche in sistemi di mammifero.

BAZ2B Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Baz2b senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BAZ2B Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Baz2b nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Baz2b, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BAZ2B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Baz2b nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BAZ2B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BAZ2B nelle cellule tumorali con espressione di Baz2b silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.