Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Bak Plasmide Double Nickase (h): sc-400646-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Bak Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Bak Double Nickase Plasmid (h) e il Bak Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BAK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Bak Antibody (AT38E2): sc-517390
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Bak Plasmide Double Nickase (h) | sc-400646-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Bak Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400646-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BAK1 codifica Bak, un effettore pro-apoptotico della famiglia BCL-2 che si localizza sulla membrana esterna mitocondriale e promuove la permeabilizzazione di tale membrana in seguito a stress cellulare. Una volta attivato, Bak va incontro a un cambiamento conformazionale e all’oligomerizzazione, consentendo il rilascio del citocromo c e la successiva attivazione delle caspasi nella via intrinseca dell’apoptosi. La funzione di Bak è strettamente regolata dalle interazioni con le proteine BH3-only e con fattori anti-apoptotici come BCL-2 e BCL-XL, collegandolo al controllo dei checkpoint della sopravvivenza cellulare e delle risposte allo stress. La disregolazione dell’apoptosi mediata da BAK1 è stata implicata nelle alterazioni della soglia di morte cellulare osservate in ambiti di ricerca che includono la biologia del cancro, la neurodegenerazione e l’omeostasi immunitaria.
Bak Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BAK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BAK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BAK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BAK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.