B-Myb Plasmide Double Nickase (h): sc-401318-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- B-Myb Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il B-Myb Double Nickase Plasmid (h) e il B-Myb Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MYBL2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: B-Myb Antibody (C-5): sc-390198
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
B-Myb Plasmide Double Nickase (h) | sc-401318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
B-Myb Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MYBL2 codifica il fattore di trascrizione B-Myb, un regolatore centrale della progressione del ciclo cellulare che coordina l’espressione dei geni necessari per l’ingresso in fase S e per la transizione G2/M. B-Myb partecipa a programmi trascrizionali associati alla proliferazione, incluse reti controllate dai fattori della famiglia E2F e dall’asse MMB/FOXM1 che sostiene l’espressione dei geni mitotici. Attraverso queste vie, MYBL2 influenza la replicazione del DNA, il controllo dei checkpoint e la stabilità del genoma. Un’espressione deregolata di MYBL2 è stata collegata a una capacità proliferativa alterata ed è stata studiata come driver della biologia tumorale associato a biomarcatori in molteplici tipi di tumore.
B-Myb Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MYBL2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MYBL2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MYBL2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MYBL2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.