B-Myb Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401318-ACT

MYBL2 codifica il fattore di trascrizione umano B-Myb, un regolatore della famiglia Myb necessario per la progressione del ciclo cellulare e per programmi di espressione genica proliferativi. B-Myb favorisce l’ingresso in fase S e la progressione mitotica coordinando reti trascrizionali che intersecano l’attività delle CDK, la segnalazione dipendente da E2F e i processi di replicazione e riparazione del DNA. Un’espressione deregolata di MYBL2 è stata associata a instabilità genomica e a un controllo alterato dei checkpoint, ed è frequentemente collegata a fenotipi proliferativi in diversi contesti rilevanti per il cancro. In quanto regolatore trascrizionale nucleare, B-Myb è comunemente studiato per il suo ruolo nell’espansione delle linee cellulari, nelle risposte allo stress e nel controllo trascrizionale dei moduli genici della fase G2/M.

B-Myb Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYBL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

B-Myb Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYBL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYBL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di B-Myb. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYBL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da B-Myb nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via B-Myb nelle cellule tumorali con espressione di MYBL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.