ATIII Plasmide Double Nickase (m): sc-419222-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATIII Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATIII Double Nickase Plasmid (m) e il ATIII Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Serpinc1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATIII Antibody (H-7): sc-271987
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATIII Plasmide Double Nickase (m) | sc-419222-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATIII Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419222-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Serpinc1 codifica l’antitrombina III (ATIII), un inibitore secretorio delle serin-proteasi che frena la coagulazione inattivando la trombina e il fattore Xa, con un’attività fortemente potenziata dal solfato di eparano e dall’eparina. Nel topo, ATIII contribuisce all’omeostasi vascolare e collega la coagulazione alla segnalazione infiammatoria e alla funzione endoteliale attraverso la regolazione di vie dipendenti da proteasi. L’alterazione dell’attività di ATIII è associata a fenotipi di ipercoagulabilità e a una maggiore suscettibilità trombotica, rendendo Serpinc1 un gene chiave per lo studio dell’emostasi e del crosstalk trombo-infiammatorio. Serpinc1 è rilevante anche per le vie di sintesi e secrezione epatica, poiché ATIII è prodotta prevalentemente dagli epatociti e circola come glicoproteina plasmatica.
ATIII Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Serpinc1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Serpinc1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Serpinc1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Serpinc1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.