Atg9b Plasmide Double Nickase (h): sc-406894-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Atg9b Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Atg9b Double Nickase Plasmid (h) e il Atg9b Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATG9B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Atg9b Plasmide Double Nickase (h) | sc-406894-NIC | 20 µg | $410.00 |
ATG9B codifica Atg9b, una proteina transmembrana multipasso che regola la biogenesi degli autofagosomi sostenendo l’apporto di membrane ai fagofori nascenti e coordinando il macchinario dell’autofagia nei siti pre-autofagosomali. Agisce all’interno delle vie centrali della macroautofagia e si interseca con il traffico endomembranoso, l’omeostasi lisosomiale e le risposte allo stress legate al sensing dei nutrienti. La perturbazione di ATG9B può alterare il flusso autofagico, con effetti su proteostasi, controllo di qualità degli organelli e segnalazione infiammatoria. Questi processi sono spesso implicati nella biologia del cancro, nella neurodegenerazione e nella disregolazione immunitaria, rendendo ATG9B un nodo utile per studi meccanicistici mirati alle vie di segnalazione.
Atg9b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATG9B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATG9B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATG9B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATG9B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.