Atg9a Plasmide Double Nickase (h): sc-408011-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Atg9a Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Atg9a Double Nickase Plasmid (h) e il Atg9a Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATG9A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Atg9a Antibody (F-3): sc-518179
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Atg9a Plasmide Double Nickase (h) | sc-408011-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Atg9a Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408011-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG9A codifica Atg9a, l’unico fattore core dell’autofagia con domini transmembrana multipasso necessario per un’efficiente biogenesi degli autofagosomi. Atg9a traffica tra la rete trans-Golgi, gli endosomi e i siti di assemblaggio del fagoforo per supportare la consegna e il rimodellamento delle membrane, coordinando le fasi precoci della macroautofagia e dei percorsi di autofagia selettiva. Attraverso i suoi ruoli nel traffico vescicolare, nella gestione dei lipidi e nel turnover dipendente dai lisosomi, ATG9A influenza la proteostasi e l’adattamento cellulare allo stress da carenza di nutrienti. Un’autofagia dipendente da ATG9A deregolata è stata associata a neurodegenerazione, biologia delle infezioni e tolleranza allo stress rilevante per il cancro, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici di fenotipi legati all’autofagia.
Atg9a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATG9A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATG9A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATG9A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATG9A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.