Plásmido Doble Nickase (h) ATG7: sc-400997-NIC

ATG7 codifica una enzima activadora tipo E1, esencial para la biogénesis de los autofagosomas, ya que cataliza reacciones de conjugación tipo ubiquitina en el sistema ATG12–ATG5 y favorece la lipidación de LC3/ATG8 a través de ATG3. Mediante estas actividades, ATG7 coordina la macroautofagia y contribuye a la proteostasis celular, la adaptación al estrés por falta de nutrientes, el control de calidad mitocondrial y la modulación de la señalización innata e inflamatoria. Las alteraciones en la función o la expresión de ATG7 se han vinculado con un flujo autofágico desregulado y una mayor sensibilidad al estrés celular, con relevancia para la neurodegeneración, la biología del cáncer, la disfunción metabólica y las interacciones huésped–patógeno asociadas a infecciones. Por ello, ATG7 se utiliza ampliamente como herramienta genética para investigar fenotipos dependientes de la autofagia y el crosstalk entre vías de señalización.

ATG7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATG7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATG7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATG7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATG7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.