ATF-6α Plasmide Double Nickase (h): sc-400259-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATF-6α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATF-6α Double Nickase Plasmid (h) e il ATF-6α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATF6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATF-6α Antibody (F-7): sc-166659
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATF-6α Plasmide Double Nickase (h) | sc-400259-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATF-6α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400259-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore di trascrizione attivante 6 alfa (ATF6α) è un fattore di trascrizione ancorato alla membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che funge da sensore ed effettore centrale della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR). In condizioni di stress del RE, ATF6α viene trasportato all’apparato di Golgi, dove una proteolisi intramembrana regolata libera un frammento N-terminale che trasloca nel nucleo per indurre chaperoni e geni della degradazione associata al RE (ERAD), coordinando la proteostasi e l’omeostasi della via secretoria. La segnalazione di ATF6α interseca le vie di PERK e IRE1, modellando il controllo della traduzione, l’equilibrio redox e gli output infiammatori durante l’adattamento allo stress. Un’attività deregolata dell’asse ATF6 è stata implicata in condizioni caratterizzate da stress proteotossico cronico, tra cui disfunzioni metaboliche, neurodegenerazione e l’adattamento tumorale a ipossia e limitazione di nutrienti.
ATF-6α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATF6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATF6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATF6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATF6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.