Plásmido CRISPR de Activación (m) ATF-6α: sc-432646-ACT

ATF6 (factor de transcripción activador 6 alfa) es un factor de transcripción bZIP anclado a la membrana del retículo endoplásmico (RE) que actúa como un sensor clave en la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). Ante estrés del RE, ATF-6α se transloca al aparato de Golgi para sufrir proteólisis intramembrana regulada, liberando un fragmento N-terminal activo que induce genes implicados en la proteostasis, la degradación asociada al RE (ERAD) y el plegamiento de proteínas mediado por chaperonas. La señalización de ATF6 se integra con las ramas PERK–eIF2α e IRE1–XBP1 para coordinar la adaptación a la carga secretora, el estrés oxidativo y señales metabólicas. La actividad desregulada de ATF6 se ha implicado en afecciones caracterizadas por estrés proteotóxico crónico, incluidas la neurodegeneración, la disfunción de células β asociada a la diabetes, estados inflamatorios y la miocardiopatía, lo que lo convierte en un nodo valioso para estudios mecanísticos en modelos murinos.

ATF-6α El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Atf6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATF-6α El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Atf6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Atf6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATF-6α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Atf6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATF-6α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATF-6α en células tumorales con expresión de Atf6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.