Plásmido CRISPR de Activación (h) ATF-2: sc-416662-ACT

El gen humano **ATF2** codifica el factor de transcripción activador 2 (ATF-2), un factor de transcripción **bZIP** activado por quinasas sensibles al estrés, incluidas **JNK** y **p38 MAPK**. Tras su fosforilación, ATF-2 regula programas génicos inducibles que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño en el ADN, la inflamación y la apoptosis, a menudo mediante heterodimerización con miembros de la familia **AP-1** e integración de la señalización **MAPK**. La actividad de ATF-2 se entrecruza con la regulación de la cromatina y la transcripción de respuesta inmediata, influyendo en programas dependientes del contexto en la señalización inmunitaria y la adaptación celular al estrés genotóxico y oxidativo. La desregulación de la señalización de ATF-2 se ha asociado con fenotipos alterados de proliferación y respuesta al estrés descritos en diversos modelos de cáncer y enfermedades inflamatorias, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de vías.

ATF-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATF2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATF-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATF2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATF2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATF-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATF2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATF-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATF-2 en células tumorales con expresión de ATF2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.