ASC/TMS1/PYCARD Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400151-NIC

PYCARD, também conhecido como ASC/TMS1, codifica uma proteína adaptadora que nucleia a montagem do inflamassoma ao conectar proteínas sensoras como NLRP3 e AIM2 à CASP1 por meio de seus domínios PYD e CARD. Essa função de andaime permite a ativação de caspase-1 induzida por proximidade, levando à clivagem de pro-IL-1β e pro-IL-18 e à indução de morte celular piroptótica via gasdermina D, posicionando a ASC no centro da sinalização da imunidade inata e das respostas ao estresse. Em células humanas, PYCARD participa do reconhecimento de patógenos, da inflamação estéril e de vias de morte celular que moldam as respostas imunes de macrófagos e de células epiteliais. A sinalização desregulada de PYCARD/ASC está implicada em distúrbios inflamatórios crônicos, neuroinflamação, doença metabólica e inflamação associada a tumores, tornando-o um alvo comum em estudos mecanísticos de maturação de citocinas e dinâmica do inflamassoma.

ASC/TMS1/PYCARD O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PYCARD em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PYCARD. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PYCARD. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PYCARD interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.