ASC/TMS1/PYCARD Plasmide Double Nickase (h): sc-400151-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASC/TMS1/PYCARD Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASC/TMS1/PYCARD Double Nickase Plasmid (h) e il ASC/TMS1/PYCARD Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PYCARD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ASC/TMS1/PYCARD Antibody (B-3): sc-514414
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASC/TMS1/PYCARD Plasmide Double Nickase (h) | sc-400151-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASC/TMS1/PYCARD Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400151-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PYCARD, noto anche come ASC/TMS1, codifica una proteina adattatrice che avvia l’assemblaggio dell’inflammasoma collegando proteine sensore come NLRP3 e AIM2 a CASP1 tramite i suoi domini PYD e CARD. Questa funzione di impalcatura consente l’attivazione della caspasi-1 indotta dalla prossimità, con conseguente clivaggio di pro-IL-1β e pro-IL-18 e induzione della morte cellulare piroptotica mediata da gasdermina D, collocando ASC al centro della segnalazione dell’immunità innata e delle risposte allo stress. Nelle cellule umane, PYCARD partecipa al riconoscimento dei patogeni, all’infiammazione sterile e alle vie di morte cellulare che modellano le risposte immunitarie di macrofagi ed epiteli. Una segnalazione PYCARD/ASC deregolata è implicata in disturbi infiammatori cronici, neuroinfiammazione, malattie metaboliche e infiammazione associata ai tumori, rendendolo un bersaglio frequente per studi meccanicistici sulla maturazione delle citochine e sulla dinamica dell’inflammasoma.
ASC/TMS1/PYCARD Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PYCARD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PYCARD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PYCARD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PYCARD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.