ARP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419169

Panoramica

Nr2f2 codifica il recettore nucleare ARP-1 (noto anche come COUP-TFII), un fattore di trascrizione regolato da ligando che si lega agli elementi di risposta ormonale per coordinare programmi genici che controllano lo sviluppo embrionale, il rimodellamento vascolare, la linfangiogenesi e l’omeostasi metabolica. ARP-1 integra segnali provenienti dall’acido retinoico e da altre reti di recettori nucleari per modulare lo stato della cromatina e l’output trascrizionale in contesti mesenchimali, endoteliali e stromali. Nei modelli murini, un’alterata attività di Nr2f2 influisce sulla specificazione del destino cellulare, sulla segnalazione angiogenica e sul patterning dei tessuti, collegando questa via ad anomalie dello sviluppo e a una biologia vascolare disregolata. I circuiti trascrizionali regolati da Nr2f2 sono inoltre utilizzati per studiare i meccanismi che plasmano i microambienti tumorali, la migrazione cellulare e le interazioni epitelio–mesenchimali in sistemi rilevanti per il cancro, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARP-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nr2f2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nr2f2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nr2f2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nr2f2 per lo studio della segnalazione di ARP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nr2f2 critici per la funzione di ARP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nr2f2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ARP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nr2f2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARP-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ARP-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nr2f2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nr2f2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.