ARF6 Plasmide Double Nickase (h): sc-400799-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARF6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARF6 Double Nickase Plasmid (h) e il ARF6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARF6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARF6 Antibody (3A-1): sc-7971
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARF6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400799-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARF6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400799-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore di ADP-ribosilazione 6 (ARF6) è una piccola GTPasi che regola il traffico di membrana, il rimodellamento del citoscheletro di actina e la segnalazione dei fosfoinositidi a livello della membrana plasmatica e dei compartimenti endosomiali. Alternando ciclicamente lo stato legato a GDP e quello legato a GTP, ARF6 coordina l’endocitosi indipendente dalla clatrina, il riciclo delle proteine di membrana e l’adesione e migrazione cellulare dipendenti dalle integrine, interfacciandosi con vie che coinvolgono la dinamica del PI(4,5)P₂ e le GTPasi della famiglia Rho. Il trasporto vescicolare dipendente da ARF6 influenza l’internalizzazione dei recettori e l’output della segnalazione a valle, plasmando processi quali la polarità cellulare e la citocinesi. Un’attività di ARF6 deregolata è stata collegata a un comportamento invasivo alterato e a programmi di segnalazione metastatica nella biologia del cancro; inoltre, è implicata nei meccanismi di ingresso ospite–patogeno e in processi di neurosviluppo rilevanti per modelli di malattia.
ARF6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARF6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARF6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARF6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARF6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.