Arc Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419184-LAC

La proteina Arc (Activity-regulated cytoskeleton-associated protein), associata al citoscheletro e regolata dall’attività, è il prodotto di un gene a espressione immediata (immediate-early) che collega l’attività neuronale al rimodellamento sinaptico e alla plasticità a lungo termine. Arc partecipa alla segnalazione postsinaptica e al traffico endocitico, inclusa la regolazione dell’internalizzazione dei recettori AMPA e dello scaling sinaptico omeostatico, mettendo in relazione programmi trascrizionali calcio-dipendenti con cambiamenti strutturali nelle sinapsi eccitatorie. Attraverso questi ruoli, Arc è centrale nei circuiti legati all’apprendimento e alla memoria e nel perfezionamento dei circuiti dipendente dall’esperienza. Un’espressione o una segnalazione di Arc deregolata è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, inclusi un’alterata connettività sinaptica e disfunzioni cognitive in modelli rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Arc (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Arc in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Arc (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Arc, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Arc. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Arc e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.