apoOL Plasmide Double Nickase (h): sc-414464-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- apoOL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il apoOL Double Nickase Plasmid (h) e il apoOL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APOOL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: apoOL Antibody (G-6): sc-390958
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
apoOL Plasmide Double Nickase (h) | sc-414464-NIC | 20 µg | $410.00 |
APOOL codifica apoOL, una proteina associata ai mitocondri, arricchita nella membrana interna, che contribuisce all’organizzazione di membrana dipendente dalla cardiolipina e all’architettura delle creste mitocondriali. Attraverso interazioni con il complesso MICOS e processi correlati di rimodellamento lipidico, apoOL influenza l’efficienza della fosforilazione ossidativa, la dinamica mitocondriale e la suscettibilità al collasso bioenergetico indotto dallo stress. Alterazioni dell’espressione di APOOL o della sua localizzazione mitocondriale sono state associate a modifiche della respirazione, della gestione delle specie reattive dell’ossigeno e a difetti dell’ultrastruttura dell’organello, processi spesso implicati in neurodegenerazione, cardiomiopatia e disfunzioni metaboliche. Di conseguenza, APOOL viene studiato in vie che regolano l’omeostasi della membrana mitocondriale, la sensibilità all’apoptosi e l’adattamento cellulare allo stress energetico.
apoOL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APOOL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APOOL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APOOL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APOOL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.