apoL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403137-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- apoL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il apoL1 Double Nickase Plasmid (h) e il apoL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APOL1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: apoL1 Antibody (A-3): sc-390440
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
apoL1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
apoL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APOL1 codifica l’apolipoproteina L1 (apoL1), una proteina legante i lipidi inducibile dagli interferoni, implicata nella difesa immunitaria innata e nelle risposte allo stress cellulare. apoL1 si localizza alle membrane intracellulari ed è stata collegata alla regolazione del traffico vescicolare, dell’autofagia e dell’omeostasi mitocondriale e lisosomiale, con effetti a valle sulle vie di sopravvivenza cellulare. Le variazioni genetiche in APOL1 sono fortemente associate a una maggiore suscettibilità a fenotipi di malattia renale, il che ha stimolato studi meccanicistici nei podociti e in altri tipi cellulari renali. APOL1 è inoltre oggetto di studio nel contesto delle interazioni ospite–patogeno e delle reti di segnalazione infiammatoria che ne modulano espressione e funzione.
apoL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APOL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APOL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APOL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APOL1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.