apoD Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402012-LAC

L’APOD umano codifica l’apolipoproteina D (apoD), una lipocalina secreta che lega e trasporta piccoli ligandi idrofobici come l’acido arachidonico, il progesterone e lipidi correlati al colesterolo. ApoD partecipa al traffico dei lipidi e al metabolismo delle lipoproteine e influenza l’equilibrio redox cellulare limitando la perossidazione lipidica e modulando le risposte allo stress ossidativo. È espressa in molteplici tessuti, con ruoli di rilievo nel sistema nervoso, ed è frequentemente studiata nel contesto dell’invecchiamento, della neuroinfiammazione, della neurodegenerazione e della disregolazione metabolica, condizioni in cui sono implicati un’alterata gestione dei lipidi e il danno ossidativo. L’attività di APOD si interseca con vie che regolano il rimodellamento di membrana, la segnalazione infiammatoria e programmi genici di adattamento allo stress rilevanti per i meccanismi di malattia, senza implicare benefici terapeutici.

Le particelle di attivazione lentivirale apoD (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di APOD in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale apoD (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione APOD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di apoD. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo APOD e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.