apoD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419166

Descripción general

El gen Apod del ratón codifica la apolipoproteína D (apoD), una lipocalina que se une a ligandos hidrofóbicos como el colesterol, el ácido araquidónico y productos de la peroxidación lipídica, contribuyendo al transporte de lípidos y a la homeostasis redox. La expresión de apoD se asocia con respuestas al estrés oxidativo, la inflamación y el envejecimiento celular, y puede influir en la remodelación de los lípidos de membrana y en vías vinculadas a lipoproteínas en el sistema nervioso y en tejidos periféricos. En el cerebro y la glía, apoD se ha estudiado en contextos de mielinización, mantenimiento sináptico y respuestas a lesiones, lo que vincula la regulación de Apod con procesos relevantes para la neurodegeneración. También se han asociado niveles alterados de apoD con fenotipos metabólicos e inflamatorios, lo que convierte a Apod en un nodo útil para analizar mecanismos de manejo de lípidos en modelos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO apoD (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Apod en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Apod junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Apod tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína apoD.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Apod para la investigación de la señalización de apoD, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Apod críticos para la función de apoD
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Apod para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido apoD CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido apoD CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Apod. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR apoD (m) y el plásmido HDR apoD (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Apod para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Apod definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.