apoD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419166

Panoramica

Il gene Apod del topo codifica l’apolipoproteina D (apoD), una lipocalina che lega ligandi idrofobici come il colesterolo, l’acido arachidonico e i prodotti della perossidazione lipidica, supportando il trasporto dei lipidi e l’omeostasi redox. L’espressione di apoD è associata alle risposte allo stress ossidativo, all’infiammazione e all’invecchiamento cellulare, e può influenzare il rimodellamento dei lipidi di membrana e le vie associate alle lipoproteine nel sistema nervoso e nei tessuti periferici. Nel cervello e nelle cellule gliali, apoD è stata studiata in relazione alla mielinizzazione, al mantenimento sinaptico e alle risposte al danno, collegando la regolazione di Apod a processi rilevanti per la neurodegenerazione. Livelli alterati di apoD sono stati inoltre associati a fenotipi metabolici e infiammatori, rendendo Apod un nodo utile per analizzare i meccanismi di gestione dei lipidi in modelli pertinenti alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO apoD (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Apod in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Apod insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Apod a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina apoD.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Apod per lo studio della segnalazione di apoD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Apod critici per la funzione di apoD
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Apod per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal apoD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal apoD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Apod. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal apoD Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR apoD (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Apod per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Apod definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.