apoC-I Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419163-ACT

Apoc1 nel topo codifica l’apolipoproteina C-I (apoC-I), un’apolipoproteina secreta e scambiabile che si associa alle lipoproteine ricche di trigliceridi e alle HDL per modulare il trasporto dei lipidi e il rimodellamento delle lipoproteine. apoC-I influenza la clearance delle lipoproteine mediata da recettori e incide sul metabolismo dei trigliceridi alterando le interazioni tra apolipoproteine, lipasi e vie di captazione sulla superficie cellulare. Nei macrofagi e in altre cellule mieloidi, l’espressione di APOC1 è collegata a programmi di gestione dei lipidi che determinano la biologia delle cellule schiumose e la segnalazione infiammatoria in contesti rilevanti per l’aterosclerosi. Una disregolazione di APOC1 è stata inoltre associata a fenotipi metabolici e a stati neuroinfiammatori, a supporto del suo impiego in studi sull’omeostasi lipidica, l’attivazione dell’immunità innata e la regolazione genica specifica di tessuto.

apoC-I Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Apoc1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

apoC-I Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Apoc1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Apoc1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di apoC-I. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Apoc1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da apoC-I nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via apoC-I nelle cellule tumorali con espressione di Apoc1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.