APOBEC3B Plasmide Double Nickase (h): sc-401700-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- APOBEC3B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il APOBEC3B Double Nickase Plasmid (h) e il APOBEC3B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APOBEC3B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
APOBEC3B Plasmide Double Nickase (h) | sc-401700-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APOBEC3B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401700-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APOBEC3B (subunità catalitica 3B dell’enzima di editing dell’mRNA dell’apolipoproteina B) è una deaminasi della citidina su DNA a singolo filamento che converte la citosina in uracile durante la replicazione e la riparazione del DNA, generando caratteristiche firme mutazionali C→T/G. Svolge un ruolo nella difesa antivirale intrinseca e si intreccia con le risposte allo stress replicativo, la segnalazione del danno al DNA e processi di riparazione mutagena che modellano la stabilità del genoma. Un’attività deregolata di APOBEC3B è stata associata a un aumento del carico di mutazioni somatiche e all’evoluzione tumorale in molteplici tipi di cancro, rendendola un fattore chiave negli studi su mutagenesi, diversificazione clonale e vie di mantenimento del genoma. I ricercatori studiano comunemente APOBEC3B nel contesto dell’immunità innata regolata dagli interferoni, del metabolismo degli acidi nucleici e dei meccanismi che collegano l’esposizione di ssDNA associata alla replicazione all’attività di editing.
APOBEC3B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APOBEC3B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APOBEC3B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APOBEC3B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APOBEC3B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.