apoA Plasmide Double Nickase (h): sc-404800-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- apoA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il apoA Double Nickase Plasmid (h) e il apoA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LPA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
apoA Plasmide Double Nickase (h) | sc-404800-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
apoA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404800-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LPA umano codifica l’apolipoproteina(a) (apoA), una glicoproteina prodotta dal fegato che si associa covalentemente all’apolipoproteina B-100 per formare la lipoproteina(a) [Lp(a)], una particella che collega il trasporto dei lipidi ai processi legati alla coagulazione attraverso i suoi domini kringle simili al plasminogeno. Le varianti in LPA influenzano i livelli circolanti di Lp(a) e modulano vie coinvolte nella proteolisi extracellulare, nel rimodellamento della matrice vascolare e nella segnalazione infiammatoria. L’alterata biologia di apoA/Lp(a) viene utilizzata come contesto molecolare per studiare i meccanismi dell’aterotrombosi e i fenotipi vascolari associati ai lipidi. Di conseguenza, LPA è un bersaglio comune negli studi di genomica funzionale che esaminano il metabolismo lipidico, le risposte endoteliali e le vie secretorie degli epatociti.
apoA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LPA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LPA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LPA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LPA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.