APLP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403937-ACT

APLP1 umano (amyloid beta precursor-like protein 1) è una glicoproteina transmembrana di tipo I, arricchita nei neuroni e funzionalmente correlata alla famiglia genica APP. Contribuisce alla formazione e al mantenimento delle sinapsi, alla crescita dei neuriti e alla segnalazione dipendente dall’attività, in parte attraverso proteolisi regolata e effetti trascrizionali mediati dal dominio intracellulare. APLP1 partecipa a processi di adesione cellula–cellula e a vie di traffico intracellulare che modellano la connettività neuronale e la plasticità sinaptica. L’alterata regolazione del processamento della famiglia APP e la disfunzione sinaptica collegano le vie associate ad APLP1 a meccanismi studiati nella neurodegenerazione e in fenotipi del neurosviluppo, rendendola rilevante per l’analisi delle reti di segnalazione neuronale.

APLP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di APLP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

APLP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus APLP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione APLP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di APLP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus APLP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da APLP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via APLP1 nelle cellule tumorali con espressione di APLP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.