Ape2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407307

Panoramica

APEX2 umano codifica l’endonucleasi apurinica/apirimidinica 2 (Ape2), una nucleasi che riconosce i siti abasici e partecipa alla riparazione per escissione di base (BER) del DNA e al mantenimento del genoma. Ape2 contribuisce al processamento delle estremità del DNA danneggiato e sostiene le risposte cellulari a lesioni ossidative e associate alla replicazione, collegando la sua attività alla gestione dello stress replicativo e alla segnalazione dei checkpoint. Influenzando l’accumulo e la risoluzione del danno al DNA, la funzione di APEX2 è rilevante per i meccanismi alla base della mutagenesi e dell’instabilità cromosomica osservate nel cancro e in altri disturbi associati a una ridotta capacità di riparazione del DNA. Di conseguenza, APEX2 è spesso studiato in contesti quali il crosstalk della risposta al danno al DNA, la biologia dello stress ossidativo e la scelta delle vie di riparazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ape2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene APEX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del APEX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto APEX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ape2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di APEX2 per lo studio della segnalazione di Ape2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni APEX2 critici per la funzione di Ape2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di APEX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ape2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ape2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus APEX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ape2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ape2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia APEX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio APEX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.