AP-1μ2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404512-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AP-1μ2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AP-1μ2 Double Nickase Plasmid (h) e il AP-1μ2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AP1M2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AP-1μ2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AP-1μ2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP1M2 codifica la subunità μ2 del complesso proteico adattatore 1 (AP-1), un componente centrale nella formazione di vescicole rivestite di clatrina a livello della rete trans-Golgi e degli endosomi. AP-1μ2 contribuisce alla selezione del carico riconoscendo motivi di smistamento presenti nelle code citosoliche delle proteine transmembrana, aiutando a instradare recettori ed enzimi attraverso la rete di traffico secretorio ed endolisosomiale. Attraverso queste funzioni, AP-1μ2 sostiene l’omeostasi delle proteine di membrana, il riciclo dei recettori e i processi di traffico polarizzato che modellano l’output di segnalazione e la composizione degli organelli. L’alterazione dello smistamento mediato dai complessi adattatori è ampiamente rilevante negli studi sul neurosviluppo, sulla segnalazione immunitaria e sulla biologia delle cellule tumorali, in cui un traffico vescicolare modificato può influenzare l’abbondanza dei recettori per i fattori di crescita e l’attivazione delle vie di segnalazione a valle.
AP-1μ2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AP1M2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AP1M2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AP1M2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AP1M2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.