ANP32D Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410569-ACT

ANP32D (acidic nuclear phosphoprotein 32 family member D) è una proteina nucleare umana della famiglia ANP32, implicata nella regolazione dell’espressione genica associata alla cromatina e in processi correlati all’RNA. Le proteine ANP32 sono caratterizzate da ripetizioni ricche di leucina e da una regione C-terminale acida, che può influenzare le interazioni proteina–proteina coinvolte nel controllo trascrizionale, nella dinamica nucleo-citoplasmatica e nelle risposte cellulari allo stress. Attraverso queste funzioni, ANP32D è rilevante per vie di segnalazione che regolano proliferazione e apoptosi, e la sua espressione alterata è stata esplorata in contesti in cui i programmi epigenetici e trascrizionali risultano compromessi. Lo studio di ANP32D aiuta a chiarire come le reti di fosfoproteine nucleari plasmino le transizioni dello stato cellulare e i circuiti di regolazione genica associati alle malattie.

ANP32D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANP32D senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ANP32D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANP32D nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANP32D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ANP32D. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANP32D nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ANP32D nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ANP32D nelle cellule tumorali con espressione di ANP32D silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.