AMID/AIFM2/FSP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-406251-NIC

AIFM2, noto anche come AMID/FSP1, codifica una flavoproteina ossidoreduttasi implicata nel controllo del bilanciamento redox cellulare e nella segnalazione della risposta allo stress. FSP1 agisce come ossidoreduttasi dipendente da NAD(P)H che sopprime la perossidazione lipidica rigenerando il coenzima Q in forma ridotta, configurandosi così come un modulatore chiave della ferroptosi e del danno ossidativo delle membrane. Oltre al ruolo antiossidante, AMID/AIFM2 è stato collegato a processi associati ai mitocondri e a vie legate all’apoptosi, con effetti dipendenti dal contesto sulla sopravvivenza cellulare in condizioni di stress ossidativo. Un’attività deregolata di FSP1 è stata associata alla biologia dei tumori e alla resistenza al danno ossidativo, rendendo AIFM2 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione della ferroptosi e sull’adattamento redox.

AMID/AIFM2/FSP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AIFM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AIFM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AIFM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AIFM2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.