alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419236-LAC

Il gene murino **Atp1a1** codifica la subunità catalitica alfa 1 della **Na⁺/K⁺-ATPasi**, un’ATPasi di tipo P che utilizza l’idrolisi dell’ATP per mantenere i gradienti transmembrana di Na⁺ e K⁺, essenziali per il potenziale di membrana a riposo, l’equilibrio osmotico e il trasporto attivo secondario. Oltre all’omeostasi ionica, **ATP1A1** partecipa a processi di segnalazione associati ai microdomini di membrana, inclusa l’interazione con le chinasi della famiglia Src e con vie a valle correlate a MAPK/ERK, che possono influenzare proliferazione e risposte allo stress. L’alterazione della funzione della Na⁺/K⁺-ATPasi è ampiamente utilizzata per studiare l’eccitabilità, il trasporto epiteliale e l’accoppiamento metabolico, e offre punti di accesso meccanicistici a fenotipi rilevanti per la malattia, come disfunzioni cardiometaboliche, disturbi neurologici dell’eccitabilità e difetti del trasporto tubulare renale. Nei sistemi murini, **Atp1a1** è inoltre impiegato come marcatore robusto dell’integrità della membrana plasmatica e come determinante della sensibilità ai glicosidi cardiaci negli studi di via di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Atp1a1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Atp1a1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Atp1a1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.