Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431814

Panoramica

Il gene murino **Aldh4a1** codifica l’aldeide deidrogenasi 4-A1 (P5CDH/ALDH4A1), un enzima mitocondriale che catalizza la conversione del Δ1-pirrolina-5-carbossilato in glutammato nelle fasi terminali del catabolismo di prolina e idrossiprolina. Regolando il flusso tra metabolismo della prolina, produzione di glutammato e bilanciamento redox mitocondriale, ALDH4A1 influenza l’omeostasi degli amminoacidi e la detossificazione delle aldeidi reattive. L’alterazione di questa via è associata a una gestione modificata dello stress ossidativo e a disfunzione mitocondriale, rendendo **Aldh4a1** un nodo utile per studiare le risposte allo stress metabolico. L’attività di ALDH4A1 è inoltre collegata a processi più ampi di sensing dei nutrienti e anaplerosi tramite l’ingresso nel ciclo TCA dipendente dal glutammato.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aldh4a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aldh4a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aldh4a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aldh4a1 per lo studio della segnalazione di Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aldh4a1 critici per la funzione di Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aldh4a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aldh4a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aldh4a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aldh4a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.