ALB/Albumin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400269-ACT

ALB codifica l’albumina, la proteina plasmatica più abbondante sintetizzata dagli epatociti e secreta nel circolo, dove mantiene la pressione osmotica colloidale e funge da principale vettore di trasporto per acidi grassi, bilirubina, ormoni e molte piccole molecole. L’albumina partecipa al trasporto sistemico di nutrienti e metaboliti, influenza l’equilibrio redox attraverso il tamponamento dei gruppi tiolici basato sulla cisteina e contribuisce alla disponibilità extracellulare di ligandi che può modulare la segnalazione metabolica epatica. L’espressione di ALB è strettamente associata ai programmi di differenziamento degli epatociti e alle reti trascrizionali specifiche del fegato, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato dell’identità e della funzione epatica. Livelli alterati di albumina e una trascrizione di ALB deregolata sono comunemente associati a disfunzione epatica e vengono spesso monitorati negli studi su danno epatico, fibrosi e meccanismi delle malattie metaboliche.

ALB/Albumin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ALB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ALB/Albumin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ALB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ALB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ALB/Albumin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ALB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ALB/Albumin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ALB/Albumin nelle cellule tumorali con espressione di ALB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.