AKR7A2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403377-NIC

AKR7A2 codifica per l’aldo-cheto reduttasi della famiglia 7, membro A2, un ossidoreduttasi citosolica NADPH-dipendente che catalizza la riduzione di aldeidi e chetoni reattivi generati durante il metabolismo degli xenobiotici e la perossidazione lipidica. Attraverso la detossificazione di specie carboniliche elettrofile, AKR7A2 contribuisce all’omeostasi redox cellulare e alla protezione dallo stress ossidativo e carbonilico, intersecandosi con il metabolismo delle aldeidi e con reti metaboliche più ampie di fase I/fase II. Un’alterata gestione delle aldeidi reattive è stata associata a danno tissutale e infiammazione, e le variazioni dell’attività di AKR7A2 sono studiate in contesti in cui lo stress metabolico e la trasformazione dei carcinogeni influenzano la vitalità cellulare e l’integrità genomica. Queste caratteristiche rendono AKR7A2 un bersaglio utile per investigare i meccanismi di detossificazione, la segnalazione adattativa allo stress e i fenotipi di malattia associati al metabolismo in modelli cellulari umani.

AKR7A2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AKR7A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AKR7A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AKR7A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AKR7A2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.