AKAP 95 Plasmide Double Nickase (h): sc-403651-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AKAP 95 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AKAP 95 Double Nickase Plasmid (h) e il AKAP 95 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AKAP8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AKAP 95 Antibody (F-11): sc-390335
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AKAP 95 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403651-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AKAP 95 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403651-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKAP8 codifica AKAP 95, una proteina nucleare di ancoraggio della chinasi A che funge da piattaforma per PKA e ulteriori fattori regolatori all’interno di compartimenti associati alla cromatina, coordinando il controllo dell’espressione genica dipendente dalla fosforilazione. AKAP 95 partecipa all’organizzazione della cromatina, al processamento dell’RNA e allo splicing, nonché a eventi mitotici come la condensazione dei cromosomi e la progressione del ciclo cellulare, collegando la segnalazione all’architettura nucleare. Per questi ruoli, AKAP8 è spesso studiato in vie che governano la proliferazione, l’omeostasi di DNA/RNA e programmi trascrizionali responsivi allo stress. La disregolazione della segnalazione nucleare e delle reti di splicing associate ad AKAP 95 è stata implicata in fenotipi rilevanti per la malattia, tra cui un controllo della crescita alterato e un processamento anomalo dei trascritti nella biologia del cancro.
AKAP 95 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AKAP8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AKAP8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AKAP8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AKAP8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.