AKAP 7 Plasmide Double Nickase (h): sc-406308-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AKAP 7 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AKAP 7 Double Nickase Plasmid (h) e il AKAP 7 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AKAP7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AKAP 7 Antibody (1F9): sc-517021
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AKAP 7 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406308-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AKAP 7 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406308-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKAP7 codifica la A-kinase anchoring protein 7, una proteina scaffold che vincola spazialmente la segnalazione della protein chinasi A (PKA) dipendente da cAMP, ancorando la PKA a compartimenti subcellulari specifici. Organizzando microdomini di segnalazione locali, AKAP7 contribuisce alla tempistica e alla specificità degli eventi di fosforilazione che influenzano la regolazione dei canali ionici, l’omeostasi del calcio e l’interazione (crosstalk) con vie più ampie di secondi messaggeri. Questa compartimentalizzazione collega AKAP7 a processi quali l’accoppiamento eccitazione–contrazione, le dinamiche di membrana dipendenti dal segnale e risposte trascrizionali controllate dalla fosforilazione. Un ancoraggio AKAP–PKA deregolato è stato associato ad alterazioni degli stati di segnalazione cellulare rilevanti per fenotipi cardiometabolici e neurofisiologici, a supporto del suo impiego come bersaglio in studi meccanicistici sulla fedeltà della segnalazione.
AKAP 7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AKAP7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AKAP7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AKAP7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AKAP7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.