AID Plasmide Double Nickase (h): sc-401542-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AID Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AID Double Nickase Plasmid (h) e il AID Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AICDA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AID Antibody (H-3): sc-518170
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AID Plasmide Double Nickase (h) | sc-401542-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AID Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401542-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AICDA codifica la deaminasi della citidina indotta dall’attivazione (AID), un enzima di editing del DNA che, durante la trascrizione, deamina la citosina trasformandola in uracile nel DNA a singolo filamento. Nelle cellule B attivate, AID avvia l’ipermutazione somatica e la ricombinazione di switch di classe dei geni delle immunoglobuline, accoppiando la formazione di lesioni alle vie di riparazione per escissione di basi e di riparazione dei mismatch, modellando affinità e isotipo degli anticorpi. Un’attività di AID deregolata può introdurre mutazioni fuori bersaglio e traslocazioni cromosomiche, collegando la disregolazione di AICDA all’instabilità genomica osservata nelle neoplasie delle cellule B e in altri contesti di segnalazione aberrante del danno al DNA. Di conseguenza, AICDA è ampiamente studiato nell’ambito dell’immunità adattativa, dei meccanismi di mutagenesi e della scelta delle vie di riparazione del DNA.
AID Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AICDA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AICDA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AICDA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AICDA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.