AGXT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419052

Panoramica

Agxt nel topo codifica l’alanina–gliossilato aminotransferasi (AGXT), un enzima perossisomiale dipendente dal PLP che converte il gliossilato in glicina e collega il catabolismo degli amminoacidi alla detossificazione del gliossilato. Questa attività sostiene l’omeostasi metabolica epatica limitando la formazione di ossalato e integrando il flusso redox e dei substrati nei perossisomi con il metabolismo mitocondriale e citosolico. L’alterazione della funzione di AGXT è associata a fenotipi di accumulo di gliossilato e iperproduzione di ossalato che modellano vie implicate in disturbi metabolici di tipo iperossaluria. Agxt è quindi un bersaglio utile per studiare la biologia dei perossisomi, lo stress ossidativo guidato dai metaboliti e le relazioni tra genotipo e metabolismo nei sistemi murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AGXT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Agxt in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Agxt insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Agxt a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AGXT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Agxt per lo studio della segnalazione di AGXT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Agxt critici per la funzione di AGXT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Agxt per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AGXT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AGXT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Agxt. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AGXT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AGXT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Agxt per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Agxt definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.