Agmatinase Plasmide Double Nickase (h): sc-405176-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Agmatinase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Agmatinase Double Nickase Plasmid (h) e il Agmatinase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AGMAT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Agmatinase Antibody (G-12): sc-166414
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Agmatinase Plasmide Double Nickase (h) | sc-405176-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Agmatinase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405176-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGMAT codifica l’agmatinasi, una metalloenzima manganese-dipendente che idrolizza l’agmatina in putrescina e urea, collegando il metabolismo dell’agmatina derivata dall’arginina alla rete biosintetica delle poliammine. Regolando la disponibilità di putrescina, l’agmatinasi influenza i pool a valle di spermidina e spermina, che supportano l’impacchettamento degli acidi nucleici, il controllo della traduzione e la progressione del ciclo cellulare. L’attività di AGMAT si interseca con il flusso dell’arginina legato all’ossido nitrico e con le risposte cellulari allo stress modulando l’agmatina, un’ammina bioattiva con ruoli neuromodulatori e di segnalazione metabolica. Un’omeostasi delle poliammine deregolata e un metabolismo alterato di agmatina/arginina sono stati associati alla biologia dei tumori, alla neurobiologia e a fenotipi infiammatori, rendendo AGMAT un bersaglio utile per studi meccanicistici sul rimodellamento metabolico.
Agmatinase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AGMAT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AGMAT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AGMAT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AGMAT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.