ADM2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403726

Panoramica

ADM2 (adrenomedullina 2; nota anche come intermedina) codifica un ormone peptidico secreto della famiglia del peptide correlato al gene della calcitonina, che trasduce segnali tramite CLR (CALCRL) con co-recettori RAMP per modulare risposte dipendenti da cAMP/PKA. ADM2 contribuisce alla regolazione del tono vascolare, alla funzione delle cellule endoteliali e della muscolatura liscia, all’omeostasi idro-elettrolitica e alla segnalazione responsiva allo stress nella fisiologia cardiovascolare e renale. In contesti cellulari, ADM2 può influenzare programmi angiogenici, vie collegate all’ossido nitrico e l’equilibrio dei mediatori infiammatori, integrando segnali paracrini/autocrini con la segnalazione mediata da GPCR. Una segnalazione di ADM2 disregolata è stata associata in letteratura a disfunzioni cardiometaboliche e vascolari, rendendola rilevante per studi meccanicistici in modelli di ricerca cardiovascolare, renale e immunometabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADM2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ADM2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ADM2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ADM2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADM2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ADM2 per lo studio della segnalazione di ADM2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ADM2 critici per la funzione di ADM2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ADM2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADM2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ADM2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ADM2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADM2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ADM2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ADM2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ADM2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.