ADF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417540

Panoramica

Il gene umano DSTN codifica il fattore di depolimerizzazione dell’actina (ADF), una proteina fondamentale legante l’actina che recide e depolimerizza la F-actina per sostenere il turnover dei filamenti e mantenere l’omeostasi del citoscheletro. Regolando la dinamica dell’actina, ADF supporta processi quali il rimodellamento dei lamellipodi, l’endocitosi, la citocinesi e la migrazione cellulare, e interagisce funzionalmente con la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e con le reti regolatorie di fosforilazione di cofilina/ADF. Un rimodellamento alterato dell’actina è associato a difetti dell’integrità della barriera epiteliale, della morfogenesi neuronale e a comportamenti cellulari invasivi, rendendo DSTN un nodo rilevante per lo studio di fenotipi di malattia guidati dal citoscheletro. La perturbazione di DSTN è quindi utile per chiarire come il flusso di actina influenzi la meccano-trasduzione, la segnalazione mediata dalle adesioni e le risposte allo stress nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ADF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DSTN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DSTN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DSTN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ADF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DSTN per lo studio della segnalazione di ADF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DSTN critici per la funzione di ADF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DSTN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ADF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ADF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DSTN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ADF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ADF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DSTN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DSTN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.