ADE2 Plasmide Double Nickase (h): sc-418581-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADE2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADE2 Double Nickase Plasmid (h) e il ADE2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PAICS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADE2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418581-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADE2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418581-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PAICS codifica la fosforibosilaminoimidazolo-succinocarbossamide sintasi, comunemente indicata come ADE2, un enzima bifunzionale che catalizza due passaggi sequenziali della via di biosintesi de novo delle purine che porta alla produzione di inosina monofosfato. Controllando il flusso attraverso la sintesi dei nucleotidi purinici, ADE2 sostiene la sintesi di DNA/RNA, l’omeostasi di ATP/GTP e il metabolismo proliferativo, con un forte accoppiamento al metabolismo a un carbonio e ai processi di recupero (salvage) dei nucleotidi. L’alterazione dell’attività di PAICS può spostare l’equilibrio redox e biosintetico cellulare ed è stata esplorata nel contesto di stati associati alla proliferazione e della riprogrammazione metabolica. PAICS è inoltre rilevante per lo studio dell’assemblaggio del purinosoma e della biosintesi compartimentalizzata dei nucleotidi in condizioni di nutrienti variabili.
ADE2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PAICS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PAICS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PAICS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PAICS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.