ADAT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-411760-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADAT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADAT1 Double Nickase Plasmid (h) e il ADAT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADAT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADAT1 Antibody (C-5): sc-271812
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADAT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-411760-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAT1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-411760-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAT1 codifica l’adenosina deaminasi che agisce sul tRNA 1, un enzima di editing dell’RNA che catalizza la deaminazione dell’adenosina in inosina nella posizione wobble di specifici tRNA, influenzando così il riconoscimento dei codoni e la fedeltà della traduzione. Questa modificazione post-trascrizionale contribuisce al controllo di qualità dei tRNA e alla proteostasi, collegando l’attività di ADAT1 a processi più ampi del metabolismo dell’RNA e alle vie di risposta allo stress. Alterazioni dell’editing dei tRNA possono perturbare la sintesi proteica e l’omeostasi cellulare, e ADAT1 è stato studiato nel contesto di fenotipi di neurosviluppo e di altri disturbi associati a difetti nell’elaborazione dell’RNA e nella traduzione.
ADAT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADAT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADAT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADAT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADAT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.