ADAM8 Plasmide Double Nickase (h): sc-407606-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADAM8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADAM8 Double Nickase Plasmid (h) e il ADAM8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADAM8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADAM8 Antibody (F-5): sc-374421
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADAM8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAM8 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAM8 (a disintegrin and metalloproteinase 8) è una proteasi ancorata alla membrana che regola la proteolisi pericellulare, lo shedding dell’ectodominio e le interazioni cellula–cellula/cellula–matrice. Attraverso i suoi domini metalloproteasico e disintegrina, ADAM8 può influenzare l’adesione e la migrazione dei leucociti, il rimodellamento della matrice extracellulare e la segnalazione infiammatoria, integrandosi in vie che coordinano le risposte al danno tissutale. Un’espressione alterata di ADAM8 è stata associata a una deregolazione del traffico delle cellule immunitarie e a cambiamenti del microambiente guidati da proteasi osservati in diverse condizioni infiammatorie croniche e in molteplici contesti tumorali, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in studi su invasione, processi associati alla metastasi e modulazione immunitaria. Queste caratteristiche rendono ADAM8 un bersaglio rilevante per analizzare le reti di segnalazione proteolitica e la regolazione dei recettori di superficie nelle cellule umane.
ADAM8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADAM8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADAM8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADAM8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADAM8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.